內置雙重安全控制機制的水稻生物反應器表達藥物蛋白質

內置雙重安全控制機制的水稻生物反應器表達藥物蛋白質

作者:師大云端圖書館 時間:2015-10-17 分類:博士論文 喜歡:1704
下載WORD版論文WORD版論文下載 下載PDF版論文PDF版論文下載

【摘要】轉基因技術已廣泛應用于作物農藝性狀改良及生物反應器生產具有重要市場價值的醫藥及工業用蛋白。但是,其在給人類社會帶來利益的同時,也存在著基因漂移和轉基因種子意外傳播的潛在風險。現有的防止基因漂移的技術只能對轉基因植物研發及應用過程中的某個階段進行監測。已有的檢測轉基因種子意外傳播的方法大都繁瑣且費時費力。必須發展安全可靠的轉基因安全控制技術和簡單易行的檢測識別技術。為此,本論文發明了苯達松選擇性殺滅轉基因水稻植株和顏色識別轉基因水稻種子的雙重安全控制技術,并利用該技術表達人胰島素原和依那西普。所獲得的主要結果如下:(1)我們研究獲得一種預置了雙重安全控制技術的生物反應器轉基因水稻。利用RNAi技術抑制苯達松解毒酶基因CYP81A6的表達,使水稻喪失原有的苯達松抗性。同時,利用遠紅熒光蛋白基因mKates158A作為標記基因使轉基因水稻能夠用肉眼識別。將抗草甘膦基因表達框、苯達松解毒酶基因的RNAi表達框,以及遠紅熒光蛋白和人胰島素原的融合蛋白質表達框克隆在同一個T-DNA載體中。利用農桿菌介導轉化法,獲得272個獨立的轉基因水稻株系。通過肉眼直接觀察、PCR檢測、Westernblot,Southernblot以及除草劑敏感性檢測試驗等進行鑒定與分析。結果表明,株系R-6、R-11和R-42不但具有紅色種子、高表達人胰島素原、對苯達松敏感,而且為單拷貝株系。因此,我們培育的轉基因水稻不僅成功表達了人胰島素原,而且具有雙重安全控制機制。在生產階段,可噴施常規劑量的苯達松殺滅常規水稻中可能混入的轉基因水稻;在加工階段,可以肉眼發現紅色警示標記的轉基因水稻種子。最重要的是,消費者在消費階段能夠方便的檢查糧食中是否污染轉基因水稻。該雙重安全控制機制極大地確保了生物反應器水稻的安全研發與釋放以及糧食作物的安全生產,也為培育能夠生產其他具有發展前景的醫藥及工業用蛋白的轉基因水稻提供了技術支持。(2)依那西普(商品名Enbrel)是抗腫瘤壞死因子最有效的藥物之一,面對非常大的市場需求量,傳統生產體系的生產能力面臨很大挑戰。本研究選擇以水稻種子為平臺,探索生產該蛋白的新方法。根據已發表的Enbrel氨基酸序列,人工合成經密碼子優化的該基因,并將其克隆于含有苯達松解毒酶基因CYP81A6的RNAi表達框的載體中。采用農桿菌介導轉化法,以草甘膦作為篩選劑,獲得了113個轉基因株系。Southernblot、Westernblot、以及苯達松敏感性檢測試驗表明,株系Enb-7和Enb-19為單拷貝株系,它們不僅成功表達了Enbrel,而且對苯達松敏感。這種表達Enbrel的生物反應器水稻中預置了選擇性殺滅機制,必要時可非常簡單方便地通過噴施草甘膦或苯達松,有目的地選擇出或滅殺掉轉基因水稻。
【作者】王東芳;
【導師】沈志成;
【作者基本信息】浙江大學,農業昆蟲與害蟲綜合防治,2014,博士
【關鍵詞】轉基因水稻;選擇性殺滅;苯達松;遠紅熒光蛋白;人胰島素原;Enbrel;

【參考文獻】
[1]杜毅.燃氣調壓器在線安全預警技術研究[D].北京建筑大學,供熱、供燃氣、通風及空調工程,2013,碩士.
[2]高蒙.脂聯素基因多態與湖北漢族人代謝綜合征及其組分的關聯研究[D].華中師范大學,生物化學與分子生物學,2013,碩士.
[3]李震.煤礦井下水泵性能分析狀態監控與故障診斷系統研究與應用[D].中國礦業大學,電機與電器,2014,碩士.
[4]王麗娟.成都地區大直徑素混凝土樁復合地基受力特性研究[D].西南交通大學,巖土工程,2013,碩士.
[5]李秀.馬克思恩格斯青年思想主要內容及其當代啟示研究[D].西南大學,思想政治教育,2014,碩士.
[6]秦曉輝,畢天姝,楊奇遜,馬世英.基于WAMS動態軌跡的電力系統功角失穩判據[J].電力系統自動化,2008,23:18-22.
[7]姜達.基于不同運輸方式競爭的高速鐵路票價制定方法研究[D].西南交通大學,交通運輸規劃與管理,2014,碩士.
[8]陳波.西安華晶光伏硅片營銷策略研究[D].西北大學,工商管理(專業學位),2012,碩士.
[9]戴暉.關于中國職業高等院校商務英語課程設計中一些重要問題的思考[D].廣東外語外貿大學,外國語言學及應用語言學,2004,碩士.
[10]臧妤爽.計時語法判斷的模態效應[D].江南大學,英語語言文學,2012,碩士.
[11]周鵬.TiAl基合金雙輝等離子滲NiCoCrAlY工藝及其性能研究[D].南京航空航天大學,材料學,2013,碩士.
[12]李超.基于利益相關者的會計職業判斷立場研究[D].中國海洋大學,會計學,2014,碩士.
[13]劉靜.我國碳稅收入測算及其和國民經濟關系研究[D].北京交通大學,2013.
[14]方飛.鋅鎳電池鋅電極的制備及電化學性能[D].浙江工業大學,2004.
[15]周磊.超聲波-Ca(OH)_2聯合破解污泥技術的實驗研究[D].中國礦業大學,環境科學,2014,碩士.
[16]陳鮑.數控滾齒加工系統工藝數據庫的研究開發[D].合肥工業大學,機械電子工程,2013,碩士.
[17]彭天乾.冷軋機計算機鋼卷跟蹤系統[J].冶金自動化,1990,05:60-61.
[18]張希舟.基于石墨烯的介質波導研究[D].浙江大學,光學工程(專業學位),2014,碩士.
[19]雷英.P公司成本管理診斷報告[D].首都經濟貿易大學,工商管理(專業學位),2014,碩士.
[20]李彥儒.超聲波輔助鐵改性煤渣的制備及除氟性能研究[D].山西師范大學,化學,2013,碩士.
[21]劉國志.視覺傳達藝術與文化產業發展關系的思考[D].吉林藝術學院,藝術設計,2012,碩士.
[22]叢欣滋.鐵素體-奧氏體異種鋼接頭高溫失效原因的分析[J].焊接學報.1989(01)
[23]齊向敏.時政文本漢譯中非語言因素的影響[D].黑龍江大學,翻譯,2013,碩士.
[24]韋蓉蓉.早期水養下混凝土抗碳化與Cl~-性能的研究[D].中國礦業大學,結構工程,2014,碩士.
[25]潘峰.信息化背景下物流網絡資源動態整合模式及流程研究[D].北京交通大學,2015.
[26]潘向雪.符號學視角下《聊齋志異》官職相關詞語英譯[D].北京外國語大學,翻譯,2014,碩士.
[27]陸芳梅.元雜劇三國戲女性形象研究[D].廣西師范大學,中國古代文學,2013,碩士.
[28]許紹陵.DP凹陷PC砂巖體的研究[J].石油地球物理勘探,1984,01:71-79.
[29]昊日樂.功能翻譯理論視角下交替傳譯中信息缺失現象及應對政策[D].內蒙古大學,翻譯,2014,碩士.
[30]馬婧智聞.高校學生社區思想政治教育研究[D].西安科技大學,思想政治教育,2013,碩士.
[31]王海瑛.由軌道電路分路不良引起兩車同處一個閉塞分區的案例[J].鐵道通信信號.2004(05)
[32]劉程琛.勞動爭議期間工資支付的法律問題研究[D].華中師范大學,經濟法,2014,碩士.
[33]劉哲.大同火山噴發年代與烘烤層歷史受熱溫度的釋光學研究[D].中國地質科學院,第四紀地質學,2014,碩士.
[34]吳平.一維復合納米結構鋰離子電池負極材料的制備、表征及應用[D].浙江大學,2012.
[35]王萍.論商務信函中You-attitude的應用——以目的為核心的分析方法[D].對外經濟貿易大學,英語,2004,碩士.
[36]景恒.硼酸鹽基LED用光轉換材料研究[D].西北大學,凝聚態物理,2013,碩士.
[37]閆國興.基于“三益”思想的政府管理職業效益評價研究[D].燕山大學,行政管理,2014,碩士.
[38]高志民,劉吉強,王聲遠.信息安全事件響應中的兩個重要問題研究[J].北京交通大學學報,2014,02:68-73+84.
[39]廖煥金.內燃機主軸承潤滑性能研究[D].湖南大學,機械工程,2014,碩士.
[40]董德彪.基于MapReduce的多主頁服務框架研究與實現[D].哈爾濱工業大學,計算機科學與技術,2013,碩士.
[41]王克敏.移動機器人網絡控制系統的研究和實現[D].浙江工業大學,2008.
[42]吳志平.死刑案件“量刑情節”的證據采信標準研究[D].蘇州大學,法律(專業學位),2013,碩士.
[43]馬云峰,李馳,高利平,史勇,黃保生,閆俊杰.風雪復合侵蝕路基孔隙特征的微細觀試驗研究[J].巖石力學與工程學報.
[44]蔡媛媛.“操縱”與戲劇翻譯[D].上海外國語大學,翻譯學,2012,碩士.
[45]劉豐.合村并居與我國土地制度創新研究[D].河北師范大學,馬克思主義原理,2012,碩士.
[46]春梅.在蒙生英語課堂上使用蒙、漢、英三語媒介語與漢、英雙語媒介語的對比研究[D].內蒙古師范大學,英語課程與教學論,2013,碩士.
[47]侯巍巍,白金泉,吳翠敏.卟啉納米材料的研究進展[J].化學試劑,2014,12:1057-1062.
[48]劉陽.副溶血弧菌和溶藻弧菌快速檢測體系的建立與應用[D].福建農林大學,預防獸醫學,2012,碩士.
[49]LIUBo-Ang,YEHao.Statisticalχ~2testingbasedfaultdetectionforlineardiscretetime-delaysystems[J].自動化學報.
[50]吳衛,姚傲雪.司母戊鼎紋飾探窺[J].設計,2015,03:85-87.

相關推薦
更多

青海快三走势图手机买 股海搏金配资 禾百在线 雪缘园即时指数 贵州快三 股票涨跌停板怎么计算 除息日 山东时时彩 米配资 天玑科技股票 中国股票指数达到1680 广西快3 韩国快乐8 新浪股票行情查询 快乐扑克 中翔配资 股票推荐骗局上千万