O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類農藥多殘留免疫分析技術研究

O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類農藥多殘留免疫分析技術研究

作者:師大云端圖書館 時間:2017-12-07 分類:碩士論文 喜歡:1220
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【摘要】本研究根據O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類有機磷農藥的公共結構,以O-甲基硫代磷酰二氯、水楊酸異丙酯和γ-氨基丁酸為原料,合成了相應的通用半抗原。通過活潑酯法將半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯,合成了相應的免疫原和包被原。用免疫原免疫小鼠,通過常規方法融合、篩選,最終獲得了一株雜交瘤細胞6B5/E3。此細胞株分泌的抗體亞型為IgG1,輕鏈為K型,親和常數為4.64×107L/mol。此單克隆抗體對水胺硫磷、甲基異柳磷和乙基異柳磷有明顯的識別作用,對其它農藥則不識別。以雜交瘤細胞株6B5/E3所分泌的單克隆抗體為基礎,通過對檢測體系中封閉物、離子強度、pH值等影響因子進行研究,建立了O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類農藥多殘留的ELISA檢測體系。在此優化的檢測體系下,分別建立了三種農藥(水胺硫磷、甲基異柳磷和乙基異柳磷)的ELISA標準曲線。以Logit(B/Bo)為縱坐標,農藥濃度的對數值為橫坐標,進行轉化,分別得到了三個線性方程。水胺硫磷的線性方程為y=-2.1313x+2.9175,相關系數R2達0.9908,I50為23.39ng/ml,最低檢測限為12.19ng/ml,在土壤、純水和大米中的平均添加回收率分別為112.86%、103.54%和104.81%。甲基異柳磷的線性方程為y=-1.9333x+3.5754,相關系數R2達0.9938,I50為70.79ng/ml,最低檢測限為34.51ng/ml,在土壤、純水和大米中的平均添加回收率分別為105.63%、107.84%和101.85%。乙基異柳磷的線性方程為y=-1.2001x+2.1553,相關系數R2達0.9796,I50為62.52ng/ml,最低檢測限為19.68ng/ml,在土壤、純水和大米中的平均添加回收率分別為100.54%、91.63%和102.27%。本研究獲得了O-(2-異丙氧基羰基苯基)硫代磷酰胺類農藥的單克隆抗體,為檢測這類農藥提供了理論依據,也為這類農藥的快速檢測提供了很好的方法,為農藥檢測試劑盒的開發提供了條件。
【作者】秦娜;
【導師】劉鳳權;
【作者基本信息】南京農業大學,植物病理學,2010,碩士
【關鍵詞】有機磷農藥;酶聯免疫吸附試驗;單克隆抗體;多殘留檢測;

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