IMS-PCR檢測食品中的單增李斯特菌

IMS-PCR檢測食品中的單增李斯特菌

作者:師大云端圖書館 時間:2019-06-29 分類:碩士論文 喜歡:1590
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【摘要】單增李斯特菌是自然界中一種常見的致病菌,能感染人類和動物;李斯特菌病是具有高致死率的一種疾病。因此,采用科學的方法檢測食品中是否含有單增李斯特菌就顯得非常重要。本文利用IMS-PCR法能快速、簡便地從食品中檢測出單增李斯特菌。免疫磁珠法(ImmunomagneticSeparation簡稱IMS法或Listertest法)是利用抗原抗體反應的原理,做單增李斯特菌的特異性和敏感性實驗;PCR(PolymeraseChainReaction)法是針對單增李斯特菌的iap基因(編碼p60蛋白)設計特異性引物,進行PCR擴增反應;做單增李斯特菌的特異性和敏感性實驗。通過對這兩種方法的分析和比較,建立IMS-PCR法,利用PCR法的引物,做單增李斯特菌的特異性和敏感性實驗。同時,國標法(檢測的標準方法)和實時熒光定量PCR法(試劑盒)作為IMS-PCR法的對照,同IMS-PCR法實驗結果進行分析和比較。IMS法:能快速捕集細菌,在培養液中進行增菌(37℃14~18h);通過溶血反應和鼠李糖反應確認是否為單增李斯特菌,需要3~7天,敏感性能達到10-7。PCR法:從食品中獲取單增李斯特菌到進行增菌培養要3~5天,提取細菌基因組DNA,并對其進行了PCR擴增,結果得到片段的長度為230bp,需要4h就得出結果,敏感性能達到10-5。IMS-PCR法:從快速捕集細菌到進行增菌培養,再經PCR擴增后得到片段長度為230bp;只需在1天內就能檢測出單增李斯特菌,縮短了檢測的時間;同時提高單增李斯特菌檢測的特異性和敏感性。IMS-PCR法的實驗結果與國標法和實時熒光定量PCR法(試劑盒)法的結果相符,然而它比國標法簡便、快速、靈敏度高,比實時定量PCR(試劑盒)法價格低;因此從經濟和實用性上,IMS-PCR法有很好的應用前景和研究價值。
【作者】杭華;
【導師】錢斯日古楞;吳斌;
【作者基本信息】大連工業大學,發酵工程,2008,碩士
【關鍵詞】單核細胞增生李斯特菌;國標法;免疫磁分離;PCR;模板;實時熒光定量;IMS-PCR;

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